抗菌斑牙膏抗菌效果檢測

抗菌斑牙膏抗菌效果檢測：抗菌斑牙膏作為日常口腔護理的重要產品，其抗菌效果的科學驗證是確保產品質量的關鍵環(huán)節(jié)。目前微生物培養(yǎng)法是檢測抗菌斑牙膏抗菌效果最chang用的方法，該方法通過模擬口腔環(huán)境，對牙膏抑制致病菌的能力進行量化評估。本文將依據 GB/T 35913-2018《口腔清潔護理用品 抗菌斑牙膏》 標準，詳細解析微生物培養(yǎng)法的檢測流程、關鍵控制點及結果判定標準，為消費者和企業(yè)提供專業(yè)參考。

檢測原理與適用范圍

微生物培養(yǎng)法的核心原理是利用 瓊脂平板擴散法 和 活菌計數法 相結合，通過觀察牙膏樣品對口腔致病菌的生長抑制作用，計算抑菌率來評價其抗菌效果。該方法適用于所有宣稱“抗菌斑"“抑制牙菌斑"的牙膏產品，尤其對含 三氯生、鋅鹽、植物提取物 等抗菌成分的產品效果驗證具有權wei性。

根據標準要求，檢測需針對兩種口腔主要致病菌：

變形鏈球菌（Streptococcus mutans）：牙菌斑主要致病菌，能分解碳水化合物產生酸性物質，導致牙齒脫礦

牙齦卟啉單胞菌（Porphyromonas gingivalis）：與牙周炎密切相關，可分泌蛋白酶破壞牙齦組織

檢測步驟與操作規(guī)范

1. 樣品制備與稀釋

按照 GB/T 35913-2018 附錄A的要求，將牙膏樣品配制成 10%（w/v）的稀釋液，具體步驟如下：

準確稱取10.0g牙膏樣品，加入90mL無菌磷酸緩沖液(PBS，pH 7.2±0.1)

用勻漿器以3000r/min速度攪拌2分鐘，制成均勻混懸液

采用 梯度稀釋法 制備1:10、1:100、1:1000三個稀釋度，每個稀釋度做3次平行實驗

關鍵控制點：稀釋過程需在 生物安全柜 內操作，避免雜菌污染;混懸液應在制備后30分鐘內使用，防止抗菌成分失活。

2. 菌液制備與接種

菌液制備：將活化后的標準菌株(變形鏈球菌ATCC 25175、牙齦卟啉單胞菌ATCC 33277)用無菌生理鹽水調整至 0.5麥氏比濁標準(約1.5×10? CFU/mL)

平板接種：取100μL菌液均勻涂布于 血瓊zhi平板(變形鏈球菌)或 布氏瓊脂平板(牙齦卟啉單胞菌)，待菌液吸收后，用無菌牛津杯(直徑6mm)在平板上放置3個，每個牛津杯內加入200μL不同稀釋度的牙膏樣品

3. 培養(yǎng)條件與觀察

培養(yǎng)條件：

變形鏈球菌：37℃ 需氧培養(yǎng) 48小時(含5% CO?培養(yǎng)箱)

牙齦卟啉單胞菌：37℃ 厭氧培養(yǎng) 72小時(85% N?+10% H?+5% CO?厭氧工作站)

結果觀察：培養(yǎng)結束后測量抑菌圈直徑(精確至0.1mm)，每個平板取3個牛津杯的平均值，同時設置 陽性對照(0.1%氯己定溶液)和 陰性對照(無菌PBS)

4. 抑菌率計算與結果判定

根據抑菌圈直徑和活菌計數結果，按以下公式計算抑菌率：

復制

抑菌率(%)=(對照組平均菌落數 - 樣品組平均菌落數)/ 對照組平均菌落數 × 100%

判定標準(GB/T 35913-2018 6.3條)：

對變形鏈球菌的抑菌率 ≥ 90%，且抑菌圈直徑 ≥ 15mm

對牙齦卟啉單胞菌的抑菌率 ≥ 80%，且抑菌圈直徑 ≥ 12mm

同時滿足上述兩項指標，方可判定產品抗菌斑效果合格

關鍵設備與注意事項

核心檢測設備

質量控制要點

菌株保存：標準菌株應按照 GB 4789.2-2016 要求進行傳代，每代次不超過5次，-80℃甘油保存可延長使用期限

培養(yǎng)基驗證：每批次血瓊zhi平板需做無菌性和促生長試驗，確保無抑制成分

平行實驗：每個樣品至少做3次平行實驗，相對標準偏差(RSD)應≤10%

陽性對照：0.1%氯己定溶液對變形鏈球菌的抑菌圈直徑應在25-30mm范圍內，否則實驗無效

常見問題與解決方案

1. 抑菌圈模糊或無抑菌圈

可能原因：抗菌成分濃度不足、培養(yǎng)溫度波動、菌液濃度過高

解決措施：

檢查牙膏樣品稀釋比例，必要時提高濃度至20%

使用高精度培養(yǎng)箱，確保溫度波動≤±0.5℃

嚴格按照麥氏比濁標準調整菌液濃度，避免過度稀釋

2. 陰性對照出現抑菌現象

可能原因：PBS緩沖液污染、操作環(huán)境交叉污染

解決措施：

更換新批次無菌PBS，做無菌性驗證

操作前對生物安全柜進行紫外消毒30分鐘，75%酒精擦拭工作臺面

3. 結果重復性差

可能原因：接種量不均勻、牛津杯放置不垂直、培養(yǎng)時間不足

解決措施：

使用自動接種儀確保菌液均勻分布

采用牛津杯定位器，保證垂直放置

延長厭氧培養(yǎng)時間至96小時，確保緩慢生長菌株充分顯色

標準更新與行業(yè)趨勢

2023年發(fā)布的 《口腔清潔護理用品 抗菌斑牙膏》（征求意見稿） 中，新增了 最小抑菌濃度（MIC） 和 時間-殺菌曲線 檢測要求，更精準評估牙膏的抗菌動力學特性。同時，標準鼓勵采用 ATP生物發(fā)光法 和 qPCR定量檢測 等快速方法，將檢測周期從傳統(tǒng)培養(yǎng)法的3-5天縮短至24小時內。

企業(yè)在產品研發(fā)中，應關注 天然抗菌成分 的應用趨勢，如茶多酚、金銀花提取物等，這些成分在微生物培養(yǎng)法檢測中表現出良好的抑菌效果(對變形鏈球菌抑菌率可達92-95%)，且安全性更高，符合消費者對“無化學添加"的需求。